一、這些有色產(chǎn)物對(duì)570nm、440nm光的吸收強(qiáng)度與洗脫出來的各氨基酸的濃度(或含量)之間的關(guān)系符合比耳定律,可與標(biāo)準(zhǔn)氨基酸比較作定性和定量測(cè)定。
二、原理:
利用樣品各種氨基酸組分的結(jié)構(gòu)不同、酸堿性、極性及分子大小不同,在陽離子交換柱上將它們分離,采用不同pH值離子濃度的緩沖液將各氨基酸組分依次洗脫下來,再逐個(gè)以另路的茚三酮試劑混合,然后共同流至螺旋反應(yīng)管中,于一定溫度下(通常為115~120℃)進(jìn)行顯色反應(yīng),形成在570nm有最大吸收的藍(lán)紫色產(chǎn)物。其中的羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物,其最大吸收在440nm。
三、說明:
?、亠@色反應(yīng)用的茚三酮試劑,隨著時(shí)間推移發(fā)色率會(huì)降低,故在較長(zhǎng)時(shí)間測(cè)樣過程中應(yīng)隨時(shí)采用已知濃度的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液上柱測(cè)定以檢驗(yàn)其變化情況。
②近年出現(xiàn)的采用反相色譜原理制造的氨基酸分析儀,可使蛋白質(zhì)水解出的17種氨基酸在12min內(nèi)完成分離,且具有靈敏度高(最小檢出量可達(dá)1pmol)、重現(xiàn)性好以及一機(jī)多用等優(yōu)點(diǎn)。
四、應(yīng)用:
1、醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用
2、飼料上的應(yīng)用
3、農(nóng)業(yè)、食品、飲料及其它