氨基酸自動分析儀是一種用于測定蛋白質水解產(chǎn)物中氨基酸含量的儀器。它能夠對氨基酸進行自動分析,主要依賴于以下幾個關鍵步驟和技術原理:
1、樣品預處理:在進行分析之前,需要將蛋白質樣品水解成單個氨基酸。這通常通過酸水解、堿水解或酶水解等方法實現(xiàn)。水解后的樣品需要經(jīng)過脫鹽、濃縮等處理,以便于后續(xù)分析。
2、衍生化反應:為了提高氨基酸的檢測靈敏度和選擇性,通常需要對氨基酸進行衍生化處理。常用的衍生化試劑有鄰苯二甲醛(OPA)和氨基酮酸(AAA)等。衍生化反應使氨基酸生成具有熒光或紫外吸收特性的產(chǎn)物,便于后續(xù)檢測。
3、色譜分離:衍生化后的氨基酸通過液相色譜(LC)或離子交換色譜(IEC)進行分離。色譜柱內的固定相具有特定的選擇性,能夠根據(jù)氨基酸的性質將其分離。常用的色譜柱有陽離子交換柱、陰離子交換柱和反相色譜柱等。
4、洗脫和檢測:分離后的氨基酸通過洗脫液從色譜柱中洗脫出來,然后進入檢測器進行檢測。常用的檢測器有熒光檢測器、紫外檢測器和質譜檢測器等。檢測器根據(jù)氨基酸衍生物的光學或質譜特性,生成相應的信號。
5、數(shù)據(jù)處理和分析:檢測器產(chǎn)生的信號被傳輸?shù)綌?shù)據(jù)處理系統(tǒng),通過積分、校正和比對等處理,最終得到氨基酸的定量結果。數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)還可以對數(shù)據(jù)進行存儲、輸出和報告生成等操作。
6、自動化控制:整個分析過程由計算機控制系統(tǒng)進行自動化控制??刂葡到y(tǒng)可以實現(xiàn)樣品加注、衍生化反應、色譜分離、洗脫、檢測和數(shù)據(jù)處理等步驟的自動控制,提高分析效率和準確性。
總之,氨基酸自動分析儀通過對樣品進行預處理、衍生化、色譜分離、洗脫和檢測等步驟,實現(xiàn)了對氨基酸的自動分析。這一過程依賴于先進的液相色譜技術、離子交換技術、熒光或紫外檢測技術以及自動化控制技術,能夠高效、準確地測定蛋白質水解產(chǎn)物中的氨基酸含量。